您所在的位置： 66论文下载网 > 临床医学论文 > 骨髓间充质干细胞输注对重型再生障碍性贫血治疗

骨髓间充质干细胞输注对重型再生障碍性贫血治疗

作者：黄永兰,黄绍良,蔡耘　来源：www.66wen.com　更新时间：2008年03月23日　编辑：ZL

　　Key words aplastic anemia； animal model； mesenchymal stem cell； hematopoiesis

　　骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells, MSC）除具有促进造血干细胞移植后造血重建外，还具有免疫调节作用，防治移植物抗宿主病［1，2］。获得性再生障碍性贫血主要是T淋巴细胞介导的骨髓造血功能衰竭［3，4］，且再生障碍性贫血患儿骨髓MSC体外增殖能力较正常对照儿童明显减弱［5］。本研究探讨人源骨髓MSC 对免疫介导性再生障碍性贫血小鼠骨髓造血功能及生存率的影响，再生障碍性贫血模型的建立

　　清洁级雌性BALB/c小鼠（H2d、Mlsb），8-10周龄，16-18 g，作为受者。清洁级DBA/2小鼠（H2d、Mlsa），6-10周龄，为淋巴细胞供者。两者均由中山大学动物实验中心提供。参照文献［6］建立免疫介导性再生障碍性贫血模型。取DBA/2小鼠颈椎脱臼处死，常规消毒，无菌取出胸腺及颈部、颌下、腋窝、腹股沟、肠系膜等处淋巴结，分别获胸腺、淋巴结细胞悬液,细胞浓度为5×106/ml，按胸腺细胞与淋巴结细胞以1∶2比例混合，即胸腺淋巴结细胞悬液。台盼蓝鉴定细胞活性，活性细胞>95%。雌性BALB/c小鼠经5 Gy 60Co γ射线全身照射（剂量率125.35 cGy/min），照射后20小时内由尾静脉注入DBA/2小鼠胸腺淋巴结细胞1×106/只。小鼠照射后立即移入中山大学动物实验中心SPF级无菌层流室内，饮用加有庆大霉素（40万U/L）和二性霉素B（50 mg/L）高压灭菌水，每日观察并记录小鼠体重、活动力、外表、饮食、大便、死亡情况，制模后28天实验终止。

　　MSC分离、扩增及输注

　　取正常儿童骨髓2 ml，按本室已建立的方法［7］进行MSC分离、扩增，传代至4-5代时收获细胞，于制模后第3天（照射后72小时）经小鼠尾静脉注射人源MSC 1×106。

　　实验分组

　　雌性BALB/c小鼠30只，分为3组：①再生障碍性贫血模型组：11只，照射+胸腺淋巴结细胞输注；②MSC组：10只，照射+胸腺淋巴结细胞输注+MSC输注；③单纯照射组： 9只，仅照射。

　　观察指标

　　生存率及生存曲线。比较各组小鼠生存情况。

　　外周血象检测于制模后第7、10、14、21天分别断尾，微量吸管采集肝素抗凝血20 μl，细胞计数仪检测白细胞（WBC）、血红蛋白（Hb）、血小板（Plt）水平。

　　单侧股骨有核细胞数测定及骨髓造血祖细胞集落培养于制模后28天或濒死时颈椎脱臼处死实验小鼠，在无菌条件下取出右侧股骨，用不含血清IMDM培养液冲洗细胞，离心，弃上清，加1 ml IMDM混匀，计单测股骨有核细胞数量。取2×104 细胞接种于1 ml甲基纤维素半固体培养基MethocultTM GFM3434（美国Stem Cell公司产品）中进行造血祖细胞集落培养，于第7天在倒置显微镜下计数粒巨噬细胞集落（CFUGM）。

　　组织学检查于制模后28天或濒死时颈椎脱臼处死实验小鼠，取小鼠肝、脾及左侧股骨，富尔马林固定，石蜡包埋切片，HE染色,显微镜下观察组织学变化。

　　统计学处理

　　用SPSS 11.5 软件处理资料，多组均数的比较采用OnewayANOVA, 绘制KaplanMeier生成函数曲线并对其进行Log Rank检验。

　　结果

　　MSC对再生障碍性贫血小鼠存活率的影响

　　照射组于照射后2-3天、2周体重轻微下降，3周左右恢复正常，至28天时均存活。模型组于制模后3-7天体重明显下降，第9天略有回升，12天再次明显下降，苍白、活动明显减少，弓背，松毛，9只于12-19天死亡，解剖发现各脏器苍白，胸腺、脾脏、淋巴结萎缩，部分小鼠小肠有出血点，另2只于3周后体重回升，活动渐增多，毛光滑，模型组小鼠28天存活率为18.2%。MSC组体重变化与照射组相似，2只于16天死亡，其28天存活率为80%。各组KaplanMeier生存函数曲线如图1所示，MSC组与模型组生存曲线比较差别具有极显著意义（Log Rank统计量=7.33，p=0.0068）。

　　MSC对外周血象的影响

　　结果见附表。如表所示，模型组小鼠于制模后7天WBC明显下降，与MSC组及照射组比较差异均具有显著意义（p<0.01）；10天时3组血象指标均显著降低；14天时模型组外周血象仍明显降低，而MSC组和照射组开始回升，至21天血象基本恢复正常。9只再生障碍性贫血模型鼠于3周内死亡，2只生存至21天时血象亦逐渐回升。

本篇文章共4页，此页为第二页　　上一页　　后页

论文搜索

新浪微博互动

腾讯QQ互动

定制论文
全部由硕士、博士撰写
保证原创，版权归您
保证PASS，否则退款

论文发表
专业期刊和核心学术期刊
均为ISSN刊号和CN刊号
保证论文发表成功率100%

论文翻译
多年翻译行业工作经验
注重翻译质量
追求高品质的翻译产品

加入会员
免费代找相关论文
付费资料，享受9折优惠
跟踪服务，应用文定制

相关文章

最近更新